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培养基和蔗糖对苔藓植物孢子萌发的影响 来源：http://www.zhibao17.com/ 更新时间：2013-03-05 阅览6042次:       苔藓植物作为孢子植物，代表着一类从水生向陆生过渡的高等植物类型，在其发育过程中不可或缺的孢子萌发过程是其区别于其他植物的重要特征。Jeffrey对苔藓植物的组织培养进行了系统的研究。自对中国苔藓植物孢子萌发有了初步的研究后，然后对多种藓类植物孢子萌发进行了系统研究。接着探讨了光照、温度及pH值等对藓类植物孢子萌发的影响，但国内外目前均未见蔗糖浓度对孢子萌发影响的研究。研究表明苔藓植物孢子分布广，易采集且对环境指示作用强，并具有一定的药用价值和较高的观赏价值。对苔藓植物孢子萌发过程的研究，将为该种藓类植物的工厂化生产和园林应用等提供科学依据，推进对其今后的开发利用。
      本试验采用Beneck，1/2MS，MS，Knop，改良Knop等5种培养基配方，琼脂，蔗糖质量浓度取40，30，20，10.0g•L－1。以上5种培养基配方，加6.7g•L－1的琼脂，并分别加入适量蔗糖，用pH酸度计将酸碱度调至pH7.0，煮沸，倒入直径为60mm的培养皿中，凝固后成固体培养基。用报纸包好，121℃下高温灭菌15min，冷却凝固后放入超净工作台上待用。取孢子捕捉仪捕捉的苔藓植物孢子，在无菌条件下用无菌水冲洗3次，1min•次-1→用体积分数为70%乙醇表面消毒6min→用无菌水冲洗3次，1min•次-1→用250g•kg－1次氯酸钠消毒5min→用无菌水清洗3次，1min•次-1→用镊子和解剖针打开孢蒴，将孢子散入适量的无菌水中，制成适当浓度的孢子悬液。用10μL移液枪将稀释后的孢子悬液分别接种在固体培养基上。培养皿放在RXZ-300B型光照培养箱中培养。培养温度为（25±1）℃，空气相对湿度80%～90%，光照时间为12h•d－1，光照强度为2000lx。接种后隔24h，将培养瓶放在倒置显微镜上观察孢子萌发情况，并统计孢子萌发率。统计时，每一瓶随机选取5个视野，统计每一视野的孢子萌发率，每一质量浓度求平均值即为该质量浓度的孢子萌发率。苔藓植物孢子为单细胞，球形或近球形，直径为11.5（9.6~17.4）μm，可能具近极薄壁区。外壁厚度约为0.8μm，分层不清楚。纹饰在光学显微镜下为小疣状突起，扫描电镜观察则显示小疣状突起形状不规则，大小不等，排列较密，上面具不明显的微突起。
      不同培养基及蔗糖质量浓度对孢子萌发的影响：苔藓植物孢子在接种24h后均已开始萌发。在Beneck培养基中，蔗糖质量浓度为30g•L－1时，孢子萌发率始终最高，在0~120h内孢子萌发保持线形增长；120h时孢子萌发率已高达84.45%。蔗糖质量浓度为20g•L－1的Beneck培养基孢子萌发率在0~120h内低于蔗糖质浓度为10g•L－1的培养基；120h后，孢子萌发率开始超过蔗糖质量浓度为20g•L－1培养基的萌发率。蔗糖浓度为40g•L-1培养基孢子萌发率0~60h内均高于未添加蔗糖的培养基孢子萌发率，但随后孢子萌发速率减慢，低于未添加蔗糖的孢子萌发率，说明添加蔗糖在初始阶段均能促进苔藓植物孢子的萌发，但当蔗糖质量浓度过高时，一段时间后又开始抑制孢子的萌发。在1/2MS培养基中，蔗糖质量浓度为30g•L－1孢子萌发率始终最高，其次为20g•L－1，蔗糖质量浓度为40g•L－1和10g•L－1时孢子萌发率差异不大，未添加蔗糖的培养基孢子萌发率最低．在MS培养基中，蔗糖质量浓度为30g•L－1孢子萌发率始终最高，在接种24h后观察时孢子萌发率已高达39.83%，接种168h后孢子萌发率高达95.93%。蔗糖质量浓度为10，20，40g•L－1时，在0~96h内萌发率相差不大，96h后，20g•L－1孢子萌发速度加快，孢子萌发率从高到底蔗糖质量浓度依次为20，10和40g•L－1。未添加蔗糖的培养基孢子萌发率始终最低。
　　　蔗糖的添加促进苔藓植物孢子的萌发，当蔗糖质量浓度为0~30g•L－1时，随蔗糖质量浓度升高孢子萌发率升高，蔗糖质量浓度为30g•L－1时孢子萌发率最高，当蔗糖质量浓度超过40g•L－1时，孢子萌发受抑制。说明苔藓植物孢子的萌发需要一定的渗透压，但当高糖造成的渗透压过高时，苔藓植物孢子的萌发会受到抑制。在显微镜下观察苔藓植物孢子萌发情况时发现，部分孢子褐化，是其本身遗传因素还是蔗糖及培养基种类对其造成的影响需要进一步探讨。

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